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背景簡介
　　前列腺癌是中老年男性的常見多發(fā)病，在男性所有類型癌中占10%～20%, 是男性最常見的癌腫。測量血清中的前列腺特異抗原PSA可以用于篩選和早期診斷前列腺癌。它是公認的診斷前列腺癌的較好的腫瘤標志物，其診斷前列腺癌的特異性為82%-97%。前列腺特異抗原(prostate specific antigen , PSA) 是與前列腺癌相關的一種抗原，屬糖蛋白類物質。PSA和肛診是目前第一線家庭醫(yī)師或泌尿科醫(yī)師們篩檢早期前列腺癌的重要工具。 

試劑盒研制開發(fā)流程和結果： 
　　1.PSA單克隆抗體的制備 
　　最終篩選得到5株雜交瘤細胞株，分別測定其亞型，并通過競爭ELISA實驗進行表位分析。其中3株在之后的抗體配對實驗中驗證配對，其效價見下表。

　　*The supernatant was from the culture of 1×106 hybridoma cells in 9 ml medium for 3 days.

　　2.建立ELISA檢測試劑盒體系 
　?。?）抗體配對分析 
　　將獲得的5株單克隆抗體分別進行純化和標記，進行兩輛交叉配對試驗，最終篩選到兩組配對可用于雙抗體夾心法的ELISA試劑盒：S-44-10 (A) — S-191-5 (D)- HRP，S-102-11(B) — S-191-5(D)- HRP。 分別用于檢測總PSA （tPSA）和 游離PSA ( fPSA)。 
　　如下圖所示（A：S-44-10抗體 B：S-102-11抗體 D：S-191-5抗體） 

　?。?）兩種試劑盒的檢測標準曲線的建立（雙單抗夾心法） 
　　經摸索優(yōu)化試劑盒中各種成分，最終選定了相應的原料使用濃度、試劑配方和反應條件。如圖所示：此兩種試劑盒檢測標準品均具有很好的線性關系。 

　　(3) 試劑盒標準品 
　　標定是測定的基礎，利用 NIBSC國際標準品對fPSA和tPSA試劑盒進行標定。 
　　NIBSC國際標準品：

• a. Prostate Specific Antigen (90:10) 96/670 (WHO International Standard or Reference Reagent);
• b. Prostate Specific Antigen (free) 96/668 (WHO International Standard or Reference Reagent);
  

  本公司利用基因工程技術，在昆蟲真核系統(tǒng)中通過昆蟲細胞桿狀病毒系統(tǒng)表達并純化了重組的PSA，重組PSA用NIBSC標準品標定后，可以作為兩種試劑盒中的參照品使用。重組PSA作為試劑盒標準品的鑒定，如下圖所示。 

　　(4)小樣本臨床實驗 
　　將自行研制的試劑盒測定PSA臨床樣本（27份陽性+30份陰性）, 以瑞典CanAg公司的試劑盒作為比較參照。

線形范圍0.5-50ng/ml，靈敏度0.5ng/ml

對于已知標準品濃度其測定的準確度為94.05%

與其他 疾病病人血清無交叉反應，特異性為100%

取得成果 
　　已研發(fā)出分別針對血清中游離PSA（f-PSA）以及總PSA（t-PSA）的檢測試劑盒，首次建立了“一步法”快速反應操作體系與流程，將整個操作過程時間縮短到了一小時以內。建立和優(yōu)化了夾心ELISA法檢測體系，包括試劑盒各組分的確定，各組分配方、使用條件及參數的優(yōu)化，檢測標準曲線的建立以及診斷標準的確定等。用NIBSC國際標準品對f-PSA及t-PSA兩種檢測試劑盒進行了標定，并通過基因工程手段自制了重組PSA蛋白，用國際標準品標定后，可用于兩種試劑盒參照品。 
　　F-PSA試劑盒靈敏度為0.46ng/ml，準確度為94.1%，特異性為100%，批內變異度為8%；T-PSA試劑盒靈敏度為0.50ng/ml，準確度為94.1%，特異性為100%，批內變異度為8%。 
　　小樣本臨床試驗證實本試劑盒與 Canag產品性能相似，57例樣本檢測的診斷結果對比顯示靈敏度 = 24 / 25 x 100% = 96.0% ,特異度 = 32 / 32 x 100% = 100% ,準確率= ( 24 + 32 )/ 57 x 100% = 98.2%。