為先天性查加斯病開發(fā)的尿檢
日前開發(fā)成功的一種查加斯病尿液納米粒子檢驗(Chunap)濃縮、保存和檢測尿液中的克氏錐蟲抗原，以在早期無創(chuàng)診斷先天性查加斯病。
先天性查加斯病的傳統(tǒng)診斷方法基于出生時的顯微鏡檢和出生九個月后的血清檢驗；然而，顯微鏡檢會漏檢許多感染，而且許多風險嬰兒出生后六到九個月時無法完成血清檢驗。
以約翰霍普金斯大學(Baltimore, MD, USA)的科學家為首的多國科研小組收集了無先天感染的Bolivian嬰兒的74份尿樣和先天感染嬰兒的23份尿樣，后者的尿樣收集在抗錐蟲治療前完成。收集了秘魯利馬12名血清陰性嬰兒的尿樣作為無病陰性對照。用顯微鏡微方法和聚合酶鏈反應(PCR)評估嬰兒出生時和出生一個月后采集的血樣。
用兩種快速診斷檢驗(RDT)檢測這些樣本，一種是間接血液凝集檢驗(IHA)，另一種是InBios國際公司(Seattle, WA, USA)的Chagas Detect，它是一種免疫層析試紙測定。科研小組評估了聚N-異丙基丙烯酰胺納米粒子捕捉、濃縮和保存克氏錐蟲抗原的能力，用臺盼藍賦予納米粒子功能，通過沉淀聚合方法合成納米粒子，并用光子相關譜法鑒定納米粒子。
然后用上述納米粒子濃縮先天感染和未感染嬰兒的尿樣。用抗克氏錐蟲單克隆抗體脂磷(酸)聚糖通過蛋白質印跡法洗脫和檢測抗原。用賽默飛世爾科技公司(Rockford, IL, USA)的加強型化學發(fā)光系統(tǒng)Supersignal West Dura顯像抗原帶紋。由一名不知道患者查加斯病狀態(tài)的化驗生物學家執(zhí)行Chunap檢驗。
納米粒子將克氏錐蟲抗原濃縮了100倍，蛋白質印跡法的檢測限從50納克/毫升降至0.5納克/毫升。Chunap檢驗作用于出生一個月后的一份樣本的靈敏度為91.3% (21/23)，與PCR作用于出生時和出生一個月后的兩份樣本的靈敏度相仿，而遠高于顯微鏡檢查兩份樣本的靈敏度。Chunap檢驗的特異性為96.5%，針對有病者為71/74，無病者為12/12。微方法和PCR的累積靈敏度分別為34.8% (8/23)和91.3% (21/23)。被粒子隔離的克氏錐蟲抗原可使其不被胰蛋白酶消化。
該研究的論文發(fā)表于2014年10月2日的《公共科學圖書館》雜志《被忽視的熱帶病》分冊。作者總結說，Chunap有望幫助邊遠地區(qū)醫(yī)療機構實現(xiàn)先天性查加斯病的早期床旁診斷。這項納米技術應用于發(fā)展中國家還有很多工作要做?？蒲行〗M目前正在優(yōu)化一種基于納米粒子磁標記的新分離方法，使得無需高速離心就能從尿液中分離粒子。雖然在這項研究中該方法用于查加斯病，但改造后也可用于檢測尿液和其它體液中的其它寄生蟲感染。
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